高壓蒸氣法是一種迅速而有效的方法。使用高壓蒸氣器，利用加熱產生蒸氣，隨著蒸氣壓力不斷增加，溫度隨之升高，通常壓力在103.4kPa(相當舊制的15磅/吋 2 或1.05kg/cm 2 )時，器內溫度可達121.3℃，維持15～30min，可殺滅包括芽胞在內的所有微生物。此法常用于一般培養基、生理鹽水、手術器械及敷料等耐濕和耐高溫物品。 大型蒸汽滅菌器的注意事項：

無菌包不宜過大(小于50cm×30cm×30cm)，不宜過緊，各包裹間要有間隙，使蒸汽能對流易滲透到包裹中央。消毒前，打開貯槽或盒的通氣孔，有利于蒸汽流通。而且排氣時使蒸汽能迅速排出，以保持物品干燥。消毒完畢，關閉貯槽或盒的通氣孔，以保持物品的無菌狀態。

二，布類物品應放在金屬類物品上，否則蒸汽遇冷凝聚成水珠，使包布受潮。阻礙蒸汽進入包裹中央，嚴重影響效果。

三，定期檢查效果。經高壓蒸汽的無菌包、無菌容器有效期以1周為宜。高壓蒸汽效果的監測：有以下三種方法。

工藝監測，又稱程序監測。根據安裝在器上的量器(壓力表、溫度表、計時表)、圖表、指示針、報警器等，指示設備工作正常與否。此法能迅速指出器的故障，但不能確定待物品是否達到要求。此法作為常規監測方法，每次均應進行。

第二種是化學指示監測。利用化學指示劑在一定溫度與作用時間條件下受熱變色或變形的特點，以判斷是否達到所需參數。常用的有：

自制測溫管：將某些化學的晶體密封于小玻璃管內(長2cm,內徑1～2mm)制成。常用試劑有苯甲酸(熔點121-123℃)等。當濕度上升至的熔點，管內的晶體即熔化，事后，雖冷卻再凝固，其外形仍可與未熔化的晶體相區別，此法只能指示溫度，不能指示熱持續時間是否已達標，因此是低標準。主要用于各物品包裝的中心情況的監測。

3M壓力指示膠帶：此膠帶上印有斜形白色指示線條圖案，是一種貼在待的無菌包外的特制變色膠紙。其粘貼面可牢固地封閉敷料包、金屬盒或玻璃物品，在121℃經20分鐘，130℃經4分鐘后，膠帶100%變色(條紋圖案即顯現黑色斜條)。3M膠帶既可用于物品包裝表面情況的監測，又可用于對包裝中心情況的監測，還可以代替別針，夾子或帶子使用。

第三種是生物指示劑監測。利用耐熱的非致病性細菌芽胞作指示菌，以測定熱力的效果。菌種用嗜熱脂肪桿菌，本菌芽胞對熱的抗力較強，其熱死亡時間與病原微生物中抗力強的肉毒桿菌芽胞相似。生物指示劑有芽胞懸液、芽胞菌片以及菌片與培養基混裝的指示管。檢測時應使用標準試驗包，每個包中心部位置生物指示劑2個，放在柜室的5個點，即上、中層的中央各一個點，下層的前、中、后各一個點。取出生物指示劑，接種于溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養基中，置55-60℃溫箱中培養48小時至7天，觀察結果。若培養后顏色未變，澄清透明，說明芽胞已被殺滅。達到了要求。若變為黃色混濁，說芽胞未被殺滅。

產品的無菌保證并不能依賴于終產品的無菌檢驗，而是取決于生產過程中采用合格的工藝、嚴格的GMP管理和良好的全面質量保證體系。工藝的制定確定應綜合考慮其被物品的性質、方法的有效性、和經濟性及、產品物品的完整性和穩定性等因素。

程序的驗證是無菌保證的重要內容必要條件。對產品(包括終容器及包裝)而言，；方法在實際應用前必須對其程序經進行驗證后，方可交付正式使用。驗證內容包括：

⑴撰寫確定驗證方案及制定評估標準。

⑵確認設備技術資料齊全、安裝正確,并能處于正常運行（安裝確認）。

⑶確認關鍵控制設備和儀表能在規定的參數范圍內正常工作運行（運行確認）。

⑷采用物品或模擬物品進行重復試驗，提供各參數范圍，確認效果符合規定（性能確認）。

⑸匯總并完善各種文件和記錄，撰寫記錄完整的驗證報告。

日常生產中，應對過程程序的運行情況進行監控，確認過程中各關鍵參數（如溫度、壓力、時間、濕度、氣體濃度及吸收的輻照吸收劑量等）均在驗證確定的范圍內。已采用的程序中關鍵的設備和工藝應定期進行再驗證。當程序發生較大變化發生變更時，（包括柜中物品放置裝載方式和數量發生的改變）時，應進行重新再驗證。