高壓蒸汽滅菌鍋俗稱滅菌鍋，是對培養基（培養料）進行濕熱滅菌的設備。制作母種宜用小型手提式滅菌鍋或中型立式滅菌鍋。制作原種、栽培種或代料熟料栽培時，可用大型臥式滅菌鍋（滅菌柜）。正確使用滅菌鍋，是安全生產的保障。

（1）滅菌鍋加水

除部分滅菌鍋配有專用供汽鍋爐外，其他滅菌鍋均需添加適量清水，再由水產生蒸汽。為此，加水必須注意兩點：一是水質，二是水量。水質不僅要求清潔，而且用蒸餾水或去離子水，以免長期使用后產生水垢，影響設備正常使用。水量需按說明書要求加足，切忌過多或過少。

（2）滅菌鍋裝載量

為了便于蒸汽在滅菌鍋內暢通循環，每次裝載量要適當。一般提倡留下1/5～1/4的容積，既經濟又有效。特別是袋裝培養料，更要預留蒸汽通道，以免影響滅菌效果。

（3）排氣升溫

關閉滅菌鍋門，開始加熱升溫。當鍋內壓力達到0.04兆帕時，需將鍋內的冷空氣排凈，否則壓力與溫度不能同步上升，出現低溫高壓現象，影響滅菌效果

滅菌鍋內空氣排除程度與溫度的關系工作壓力工作溫度（℃）兆帕（千克力/厘米2）冷空氣全排冷空氣排2/3冷空氣排1/2冷空氣排1/3冷空氣未排0.035（0.35）720.07（0.70）900.11（1.05）1000.14（1.41）1090.175（1.76）1150.21（2.00）121（4）滅菌條件

母種培養基的滅菌條件是：121℃，0.11兆帕，20～30分鐘；原種、栽培種培養基的滅菌條件是：126℃，0.14兆帕，1.5～2小時。

1．首先將內層滅菌桶取出，再向外層鍋內加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。 

2．放回滅菌桶，并裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠，以免防礙蒸汽流通而影響滅菌效果。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。 

3．加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內層滅菌桶的排氣槽內。再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。 

4．用電爐或煤氣加熱，并同時打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內的冷空氣。待冷空氣完全排盡后，關上排氣閥，讓鍋內的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當鍋內壓力升到所需壓力時，控制熱源，維持壓力至所需時間。本實驗用 1．05kg/cm2，121．3℃，20分鐘滅菌。 

5．滅菌所需時間到后，切斷電源或關閉煤氣，讓滅菌鍋內溫度自然下降，當壓力表的壓力降至0時，打開排氣閥，旋松螺栓，打開蓋子，取出滅菌物品。如果壓力未降到0時，打開排氣閥，就會因鍋內壓力突然下降，使容器內的培養基由于內外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養基而發生污染。 

6．將取出的滅菌培養基放入 37℃溫箱培養24小時，經檢查若無雜菌生長，即可待用。